Quick Cell支原體去除/預防試劑盒

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產品簡介

支原體（Mycoplasma）是一種沒有細胞壁的原核生物，大小約0.1 - 0.6微米。目前，已發現的支原體品種有100多種。 由于支原體直徑較小，經常可以穿過實驗室常規的0.20微米孔徑的除菌濾膜，高壓過濾時，甚至可以穿過0.10微米孔徑的除菌濾膜，造成細胞的支原體污染。本公司開發的支原體清除試劑Ⅰ含有抑制支原體蛋白質合成的藥物，而支原體清除試劑Ⅱ含有抑制支原體DNA合成的藥物。由于兩種試劑的作用機理不同，支原體清除試劑Ⅰ需要處理不少于15天，而支原體清除試劑Ⅱ只需處理7天。兩者都可以達到*殺滅和清除支原體的目的。大約5-10%的支原體會對Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ或Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ產生抗性，此外，也有3-5%左右的細胞會在殺滅支原體的過程中死亡，由于上述兩個原因，我們一般建議同時購買兩種支原體清除試劑，如果發現細胞被污染，可以將細胞分成兩份，分別用Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ和Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ同時進行殺滅，這樣支原體對兩種藥物同時產生抗性和處理過程中細胞同時死亡的概率會非常低。

試劑盒組成

       Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ              1.0 mL (1000×)

       Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ              1.0 mL (1000×)

運輸和儲存

      常溫運輸，-20 ℃保存，可以保存2年。

使用方法

（一）Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ

1. 使用之前，先將Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ用PBS或者無血清培養液稀釋10倍后，放4℃冰箱保存。

2. 將50-100萬個細胞鋪到60 mm的細胞培養皿內，加入4 mL含Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ的正常細胞培養液（使用稀釋10倍后的Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ，按1:100比例加入）。

3. 每2-3天更換細胞培養液，加入新鮮的含Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ的正常細胞培養液。期間如果細胞密度過大，請保持細胞密度適當（貼壁細胞可能需要胰酶消化），并更換新的培養皿。

4. 處理15天后，可以用支原體檢測試劑盒進行檢測，檢測支原體是否殺滅*。如果仍有支原體殘留，可以考慮再處理6天。

5. 以后每隔1個月進行支原體的常規檢測，以保證沒有新的支原體污染。

（二）Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ

1. 使用之前，先將Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ（注意：支原體清除試劑Ⅱ在-20 ℃保存后，解凍時可能會有細小的結晶析出）用PBS或者無血清培養液稀釋10倍后，（支原體清除試劑Ⅱ可以*溶解，放4℃冰箱保存。

2. 將50-100萬個細胞鋪到60 mm的細胞培養皿內，加入4 mL含Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ的正常細胞培養液（使用稀釋10倍后的Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ，按1:100比例加入）。

3. 每天更換細胞培養液，加入新鮮的含Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ的正常細胞培養液。期間如果細胞密度過大，請保持細胞密度適當（貼壁細胞可能需要胰酶消化），并更換新的培養皿。

4. 處理7天后，可以用支原體檢測試劑盒進行檢測，檢測支原體是否殺滅*。如果仍有支原體殘留，可以考慮再處理3天。

5. 以后每隔1個月進行支原體的常規檢測，以保證沒有新的支原體污染。

注意事項

      1. 建議將細胞分成兩份，分別用Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ和Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ同時進行殺滅，這樣支原體對兩種藥物同時產生抗性和處理過程中細胞同時死亡的概率會非常低。如果單獨使用一種清除試劑的話，萬一發現細胞對其中一種清除試劑有抗性或者細胞在處理過程中死亡，又要再花7-15天的時間嘗試另外一種清除試劑的效果。

      2. 處理過程中，注意每天觀察細胞的狀況，如果發現支原體清除試劑對細胞的毒性較大，可以加大培養液中的血清濃度或者提高細胞的密度。

      3. Quick Cell支原體清除試劑Ⅰ和Quick Cell支原體清除試劑Ⅱ在降低濃度后（使用稀釋10倍后的Quick Cell支原體支原體清除試劑Ⅰ或者Ⅱ，按1:500比例加入）也可以加入到培養液中作為短期（1-2個月）的支原體污染預防藥物，但是不建議在細胞培養液中長期（超過2個月）加入，因為有可能導致對該兩種藥物有抗性的支原體出現。

Quick Cell支原體清除試劑的效果圖：左側為未經支原體清除試劑處理的人Hela細胞,經DAPI染色后，除了細胞核為藍色外，細胞質也有大量的絮狀核酸物質被染成藍色，這些處于細胞質的核酸物質就是支原體DNA。而右側為經過本公司的支原體清除試劑Ⅱ處理7天的Hela細胞，經DAPI染色后，除了細胞核為藍色外，細胞質沒有任何絮狀核酸物質被染成藍色，說明支原體已經被清除。

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