2 x Taq PCR Plus Mix

產品描述

2 x Taq PCR Plus Mix 是PCR 反應預混液，其中包含Taq DNA Polymerase、dNTPs、反應緩沖液、loading Dye 等成分，使用時只需取適量本產品，加入模板和引物，并加入 ddH2O 補足體積，使反應體系濃度為 1× 即可進行 PCR 反應。PCR 產物 3' 端帶突出 A 堿基，純化后可直接用于 T/A 克隆。

本產品采用復合酶系統即Taq DNA聚合酶與3'→5'外切酶活性蛋白協同作用，可在優化反應緩沖體系下實現高產量擴增，能擴增≤7 kb的DNA片段，且兼容30%-70% GC含量的模板。相較于傳統Taq酶（WT-Taq），其延伸速率提升2-4倍，顯著縮短反應周期。

本產品中包含兩種染料，PCR反應完成后無需額外添加 loading buffer，可以直接進行電泳，且電泳過程中會出現藍色和紅色兩個指示條帶。該染料不影響 PCR 擴增效率，但對于需要對 PCR 產物進行吸光度、熒光等光學分析的實驗，建議在分析前對 PCR 產物進行純化，或使用無染料的PCR預混液。

訂購信息

運輸與保存

藍冰運輸。-20℃保存，有效期24個月。

使用方法

1.     常規 PCR 反應體系（冰上操作）

(1)     引物推薦終濃度為 0.2~0.4 μM，效果不佳時可以在 0.1~1 μM 濃度范圍內進行調整； 

(2)     不同模板*佳反應濃度有所不同，以 50 μL 體系為例：模板為基因組 DNA 時，一般推薦的使用量為 10~200 ng；當模板為質粒或病毒 DNA 時，一般推薦的使用量為 10 pg~5 ng。 模板量過多時容易造成非特異性擴增。

2.     三步法 PCR 反應程序

3.     兩步法 PCR 反應程序

(3)     該預變性條件適合絕大多數擴增反應， 對于一些復雜模板， 例如：菌液、菌落（尤 其是酵母）的PCR 擴增，預變性時間可適當延長至 10 min，以提高預變性效果；

(4)     退火溫度請根據引物 Tm 值設置。如果需要，推薦通過建立溫度梯度尋找引物與模板結合的*適溫度。此外，退火溫度直接決定擴增特異性，如發現擴增特異性差，可適當提高退火溫度。

(5)     關于延伸速率，當目的片段長度不超過 3 kb 時，推薦使用 15 sec/ kb；當目的片段長度大于 3 kb 時，推薦使用 30 sec/kb。延伸速率與模板復雜程度有關，如遇產率較低可適當提高延伸時間。

注意事項

1.         本產品科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。

2.         本產品中2 x Taq PCR Plus Mix需融解*全后使用，防止離子濃度不均勻。

3.         建議將所有的反應組分在冰上配制，最后加入2 x Taq PCR Plus Mix。

4.         使用基因組模板進行較長片段擴增需要使用高質量純化的DNA模板，可以提高 PCR 成功率。

5.         本產品擴增產物可用于 T/A 克隆。由于本產品含有 Loading Dye，PCR 產物需經過切膠回收后才可充分去除 Loading Dye。

6.         建議使用泡染法進行電泳后染色，膠染法會導致紅色指示條帶發生彌散，不利于條帶指示，對藍色指示條帶無影響。藍色條帶在 1% TAE 緩沖液中遷移速率約等于1500 bp，紅色條帶在 1% TAE 緩沖液中遷移速率約等于100 bp。

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